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小鼠血小板清除抗體 試劑
產(chǎn)品時間:2025-10-30
小鼠血小板清除抗體 試劑

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同形像統(tǒng)計圖:大鼠免疫球蛋白

形式:purif

應(yīng)用程序:負(fù)控制#R300

大小:0.5毫克

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同形像統(tǒng)計圖:大鼠免疫球蛋白

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應(yīng)用程序:負(fù)控制#R300

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技術(shù)協(xié)議

小鼠血小板表面糖蛋白的流式細(xì)胞分析

-制備稀釋或洗凈的全血

-制備洗滌小鼠血小板

-血小板表面糖蛋白表達(dá)單色分析

-血小板活化雙色分析

免疫組織化學(xué)(含丙酮固定冰凍切片)

免疫沉淀反應(yīng)

免疫印跡(Western Blot Analysis)

小鼠血小板表面糖蛋白的流式細(xì)胞分析

緩沖液和試劑

Tris緩沖鹽水/肝素(TBS/Hep): 20 mM Tris/HCl;137 mM NaCl;pH值7.3;含肝素20 U/ml。

磷酸鹽緩沖鹽水(PBS): 137 mM NaCl;2.7 mM KCl;1.5 mM KH2PO4;8mm Na2HPO4;pH值7.14。

Tyrode’s Buffer(改性):134 mM NaCl;0.34 mM Na2HPO4;2.9 mM KCl;12mm NaHCO3;20 mM Hepes;pH值7.0;5 mM葡萄糖;0.35% (w/v)牛血清白蛋白

Apyrase: 10u /ml H2Obidest原液(-20℃保存)

前列腺素(前列腺素2,PGI2): 1mm儲存在H2Obidest中(保存在-20°C)

CaCl2: 1 M的H2Obidest庫存

最重要的

配制稀釋或洗凈的全血

用肝素化玻璃毛細(xì)血管(如環(huán)帽)從眶后神經(jīng)叢取50µl血液,放入含有200µl TBS/肝素(20 U/ml)的1.5 ml管中。

用1ml Tyrode緩沖液稀釋,用于流式細(xì)胞術(shù)分析。

制備洗血,將稀釋后的血液900 x g離心5分鐘,去除上清,將微球重懸于1.25 ml Tyrode緩沖液中。

實驗開始前,直接加入1mm的CaCl2。

注意:對于凝血酶誘導(dǎo)的血小板活化,必須去除血漿以防止抗凝血酶活性

最重要的

小鼠洗凈血小板的制備

洗滌血小板的制備是一種更耗時的方法,需要更多的血液,但產(chǎn)生的血小板制備可以使用幾個小時。

從眶后神經(jīng)叢用1.5 cm的玻璃毛細(xì)血管采集0.5 - 1ml血液,放入1.5 ml的管中,管中含有200µl TBS/肝素(20 U/ml)。

樣品在500 x g下離心5分鐘,將富血小板血漿(PRP)轉(zhuǎn)移到新管中。為了最好地恢復(fù)血小板,服用全白期,包括一些紅細(xì)胞。

將血小板懸液在300 × g下離心8分鐘,將不含紅細(xì)胞的PRP移入新管。

加入0.5µM prostacyclinin (PGI2), 1300 × g離心5分鐘。

將血小板顆粒重懸于1ml Tyrode’s緩沖液中,加入0.02 U/ml apyrase和0.5µM prostacycyclin, 37℃孵育5min, 1300 × g離心5min。

重復(fù)步驟5,將血小板小球重懸于0.5 ml Tyrode緩沖液中,加入0.02 U/ml apyrase, 37℃孵育30 min。

最重要的

血小板表面糖蛋白的單色分析

將5µl特異性或陰性對照抗體與25µl稀釋的全血或洗過的血混合在測定管中,旋渦混合1-2秒。

室溫孵育15分鐘。

加入400µl PBS停止反應(yīng),30分鐘內(nèi)分析。


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