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CellutronCellutron 北京代理
產品時間:2020-03-16
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北京華新康信生物科技有限公司代理cellutron品牌。北京華新康信生物科技有限公司是 cellutron品牌代理商。

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Cellutron代理 北京華新康信生物科技有限公司

 

北京華新康信生物科技有限公司專注于生命科學領域,由豐富從業經驗的技術團隊和管理團隊組建而成,主營生物化學試劑,儀器,實驗耗材等。

1廣泛的產品輻射領域,試劑,耗材,儀器等。

2產品種類齊全,北京華新康信與國外諸多生命科學領域*合作眾多,代理品牌Glycan Therapeutics,Intact Genomics,Integral Molecular,Medkoo,Niomech,Terragene,Anshlabs wako,EZbioscience,CMCTAG,Anatrance ,Favorage ,Affinity,Advanced biomatrix,bioplastics,天地人和,TRC,凱杰,義翹,sciencell;價格優勢品牌:seracare,Streck,Toxin,Zeptometrix,sigma,ForteBio,CanSyn,polyplus,santa,chormsystems,bethyl ,moltox, permagenlabware ,bioflux,Bio-Rad, coriell,   listlabs, ZYMO , ABclonal  , EY laboratories  ,greatcellsolar , agdia , beckman , Bioxcell,,biomax ,usascientific , TRC ,nist ,americanelements,cayman  , Fisher ,thermofisher ,  nanopore,   日立,  三菱株式會社 ,RD, takara等,緊跟生命科學的發展,不斷滿足客戶的需求,為各位的科研之路上添磚加瓦!

3 一手貨源,價格優勢明顯

4信譽良好,客戶范圍廣,包括清華、北大、交大、復旦、中山等100多所高校,百泰藥業,康龍化成,藥明康德等企業。

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Cellutron穩定的細胞系發展

Cellutron提供定制的高質量穩定細胞系服務,以優化您感興趣的蛋白質的生產。基因到細胞服務包括基因合成,靶向載體的構建,細胞培養,轉染以及穩定細胞系的藥物選擇和轉基因表達的確認。借助的載體技術,Cellutron能夠在多種細胞類型(包括小鼠和人類干細胞以及iPS細胞)中產生穩定的細胞系。

穩定的細胞系發展

Cellutron提供定制的高質量穩定細胞系服務,以優化您感興趣的蛋白質的生產。基因到細胞服務包括基因合成,靶向載體的構建,細胞培養,轉染以及穩定細胞系的藥物選擇和轉基因表達的確認。借助的載體技術,Cellutron能夠在多種細胞類型(包括小鼠和人類干細胞以及iPS細胞)中產生穩定的細胞系。

穩定細胞系    穩定細胞系

初轉導熒光報告基因兩個月后,穩定轉染的小鼠胚胎干細胞表達GFP或RFP。

親代細胞系:人和小鼠胚胎干細胞和iPS,HEK293,CHO,BHK,NS0細胞,H9C2或您的細胞系。

穩定細胞系生成的過程和時間表:

1.哺乳動物細胞表達載體的基因合成與構建           

執行優化的基因合成并將基因克隆到哺乳動物細胞表達載體中(1周)

2.轉基因表達分析      

用表達載體轉染親代細胞系,并通過RT-PCR / Western blot / ELISA評估轉基因的表達(1周)

3.穩定轉染子的篩選

對頂ji克隆進行穩定性篩選,并評估10個傳代的終細胞系。(約4周)

向客戶交付2瓶頂ji穩定克隆

心肌細胞分離

快速,改進的系統,產量高

原代細胞分離系統,科學家*的工具

轉基因和miRNA表達的微圓載體

訂單信息

一般信息

安全有效的載體系統的開發是在真核細胞中成功進行基因轉移的關鍵步驟。

小環載體是新穎的超螺旋小表達盒,其通過在大腸桿菌中體內的位點特異性重組衍生自常規質粒DNA 。小圓載體不攜帶抗生素抗性基因,也不攜帶細菌復制起點,因此顯著降低了免疫和炎癥反應,并有效地保護了轉基因表達不會由于細菌主鏈序列而被沉默。

在大腸桿菌中,通過定點重組從體內的親本質粒產生了微環載體。親本質粒攜帶有位于位點特異性Cre重組酶的兩個突變loxP位點(即,每側的末端5個核苷酸的突變)側翼的真核表達盒,并在大腸桿菌的控制下轉化入表達Cre重組酶的工程化大腸桿菌菌株。 pBAD / araC啟動子。

L-阿拉伯糖可有效誘導細菌菌株中Cre重組酶的表達,從而切除中間的DNA序列。兩個loxP位點之間的重組促進了親本質粒分裂成兩個超螺旋DNA:(1)帶有用于轉基因和miRNA的真核表達盒和雙突變loxP位點的微圓載體,以及(2)包含細菌主鏈序列和野生型loxP位點。雙突變loxP位點的形成損害了Cre重組酶對序列的識別,導致平衡向小圓載體生產的轉移。在誘導Cre重組酶之后,從細菌裂解物中分離出不同形式的超螺旋DNA,并進行限制酶消化以線性化親本質粒和微質粒。隨后,使用氯化銫梯度進一步純化微圓載體。

基于miRNA的基因敲低

基于Cellutron miRNA的基因敲除(KD)具有以下優點:

1.具有高度序列特異性,與靶基因具有100%的同源性

2.比其他基因敲除方法(例如siRNA)更有效

3.允許將兩個或多個miRNA結構克隆到同一表達盒中,以進行單個或多個靶標敲除。

4.具有強大的Pol II啟動子,可在多種細胞類型中高效表達miRNA。5

5.產生穩定的基因敲除細胞系

6. GFP或RFP報告基因的表達,用于監測轉染效率

7.細胞毒性很小或沒有

誘導表達載體系統

Cellutron用Cre-Loxp技術開發了一種新型的誘導表達系統,并提供了調節轉基因表達的能力。該系統包含兩個具有強大CAG啟動子的表達載體,用于高效基因表達。pEGFP / RFP-miRNA-BL和pEGFP / RFP-T2A-GOI-BL是表達載體,其EGFP和3X終止序列旁接兩個loxP位點,其后是順順反子序列,用于表達RFP和miRNA或編碼蛋白質的轉基因。另外,在miRNA和編碼蛋白質的轉基因的表達盒的下游克隆了殺稻瘟菌素(BL)表達盒(用于在哺乳動物細胞中選擇藥物)。與可誘導表達載體共轉染需要pCreER-IRES-Puro。

共轉染后,系統初僅表達EGFP,即一種報告蛋白,可方便地監測轉染效率。可以在體外和體內添加4-OHT,以激活Cre重組酶的條件活性形式,從而導致miRNA或編碼蛋白質的轉基因的高水平和調控表達。

誘導表達系統使您能夠:

1.在分裂和非分裂細胞(包括成體和胚胎干細胞以及iPS細胞)中高效轉染。

2.在體內和體外條件表達miRNA或編碼蛋白質的轉基因。

3.生成穩定的細胞系,以長期表達miRNA或編碼蛋白質的轉基因。

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