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    肌鈣蛋白I心臟 - 人類(lèi)

    發(fā)布時(shí)間: 2025-06-18  點(diǎn)擊次數(shù): 468次

    肌鈣蛋白I心臟 - 人類(lèi)

    貓編號(hào) 8T53

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    • 貓編號(hào)。

    8T53

    • 來(lái)源:

    人類(lèi)心肌組織。

    從器官捐贈(zèng)者采集的血液樣本檢測(cè)結(jié)果顯示,其為乙肝表面抗原、HIV-1HIV-2抗體、丙肝病毒和梅毒螺旋體陰性。

    • 應(yīng)用程序:

    TnI是肌鈣蛋白的抑制亞基,肌鈣蛋白是細(xì)肌絲調(diào)節(jié)復(fù)合物,賦予骨骼肌肌動(dòng)蛋白-肌球蛋白ATP酶活性對(duì)鈣的敏感性。

    TnI 存在三種同工酶,一種對(duì)應(yīng)于慢肌骨骼肌,一種對(duì)應(yīng)于快肌骨骼肌,一種對(duì)應(yīng)于心肌。兩種骨骼肌 (skTnI) 和一種心肌 TnI 形式的氨基酸序列有 40% 的差異。此外,人類(lèi)心肌 TnI 在其 N 末端區(qū)域有骨骼肌形式所沒(méi)有的額外氨基酸殘基,這使得這種蛋白質(zhì)成為指示心臟特異性的有前途的分析物。在心肌梗死 (MI) 發(fā)生后的前 15 小時(shí)內(nèi),心肌 TnI 的釋放模式與 CK-MB 相似,但在血清中保持升高長(zhǎng)達(dá) 6 天。這種觀察和心肌 TnI 的獨(dú)氨基酸序列使其成為 MI 的重要診斷標(biāo)志物。

    TnI 適用于免疫檢測(cè)中的標(biāo)準(zhǔn),用于早期檢測(cè)心肌梗死、生產(chǎn)抗血清的免疫原和標(biāo)記物用于碘化。

    • 分析:

    純度 > 98 % (SDS-PAGE)

    免疫印跡法用特異性單克隆抗體與肌鈣蛋白I心臟亞型反應(yīng),確認(rèn)免疫活性。

    TnI 濃度通過(guò)分光光度法測(cè)定,使用 A (0.1 %, 280 nm, 1 cm) 等于 0.42。該系數(shù)是根據(jù)人類(lèi) cTnI 的氨基酸組成 (FEBS Lett, 270, 57-61) 計(jì)算得出的。

    • 展示:

    0.01 M鹽酸凍干。

    建議用Tris/尿素緩沖液(20 mM TrispH 7.57 M尿素,5 mM EDTA15 mM 2-基乙醇)將此產(chǎn)品重新溶解至接近1 mg/ml的濃度。

    在中性pH值和生理鹽濃度下溶解度有限。

    • 存儲(chǔ):

    凍干 -20°C(允許 -15 … -30 °C
    再溶解 -70°C(允許 -65 … -80 °C

    • 其他信息:

    避免反復(fù)凍融。建議在重組成分后分裝。

    • 材料安全注意事項(xiàng):

    此產(chǎn)品僅售用于研究或進(jìn)一步制造。處理此材料時(shí)應(yīng)遵循標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室操作程序。

     技術(shù)說(shuō)明

    血液凝固與貧血骨代謝心臟標(biāo)志物生育與妊娠激素標(biāo)志物免疫學(xué)與血清學(xué)傳染病炎癥腎臟疾病代謝綜合征神經(jīng)科學(xué)甲狀腺疾病腫瘤標(biāo)志物獸醫(yī)學(xué)

     

     嵌合型心肌肌鈣蛋白I抗體

    與嗜異性抗體相關(guān)的問(wèn)題已被認(rèn)知數(shù)十年。盡管對(duì)嗜異性抗體在普通人群中流行率的估計(jì)差異較大,但普遍認(rèn)為至少達(dá)到10%1)。

     

    當(dāng)人體接觸不同動(dòng)物或動(dòng)物源制品時(shí),就會(huì)產(chǎn)生嗜異性抗體。這些抗體通常為人類(lèi)抗小鼠(HAMA)、抗兔、抗山羊、抗綿羊、抗牛、抗豬、抗大鼠或抗馬抗體。在免疫診斷領(lǐng)域,該問(wèn)題最常與HAMA相關(guān),因?yàn)榇蠖鄶?shù)診斷檢測(cè)都使用小鼠源抗體。

     

     HAMA可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果

    在診斷檢測(cè)中,HAMA可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果,有時(shí)也會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果(2-3)。假陽(yáng)性結(jié)果是由HAMA對(duì)檢測(cè)抗體的交聯(lián)作用引起的,而當(dāng)HAMA與檢測(cè)抗體結(jié)合并由此阻斷抗原結(jié)合時(shí),就會(huì)產(chǎn)生假陰性結(jié)果(見(jiàn)圖1)。

     

    ![1. 人類(lèi)抗小鼠抗體(HAMA)可在免疫測(cè)定中引起假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果。

     

    假陽(yáng)性結(jié)果可能會(huì)延誤正確診斷,若該檢測(cè)用于急性心肌梗死(AMI)等危及生命疾病的診斷,甚至?xí)?dǎo)致不必要的住院治療(4)。一項(xiàng)針對(duì)因疑似心肌梗死(MI)而接受心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)的受試者研究發(fā)現(xiàn),HAMAcTnI升高的受試者中導(dǎo)致5.5%的假陽(yáng)性,在cTnI升高但肌酸激酶正常的受試者中導(dǎo)致14%的假陽(yáng)性(5)。

     

    為解決HAMA帶來(lái)的問(wèn)題,大多數(shù)檢測(cè)方法制造商在檢測(cè)開(kāi)發(fā)過(guò)程中會(huì)采取額外措施。常用的程序是使用阻斷試劑抑制非特異性結(jié)合,這些試劑從普通小鼠IgG到更精細(xì)的配方不等。盡管在大多數(shù)情況下這些措施是足夠的,但確實(shí)會(huì)在材料和人工方面增加額外成本。使用Fab片段也可以抑制HAMA的影響,但這同樣增加了一個(gè)生產(chǎn)步驟,并增加了每次檢測(cè)的成本。

     

     臨床應(yīng)用

    急性心肌梗死的早期標(biāo)志物

     

     嵌合抗體有助于避免HAMA效應(yīng)

    在診斷檢測(cè)中解決HAMA問(wèn)題的一個(gè)有力工具是使用嵌合抗體或全人源化抗體。由于對(duì)臨界值要求低,且即使在AMI患者的血漿中cTnI水平也非常低,肌鈣蛋白檢測(cè)特別容易受到HAMA的影響。我們現(xiàn)在已通過(guò)將抗體恒定區(qū)從小鼠來(lái)源序列改為人類(lèi)來(lái)源序列,將我們的兩種抗心肌肌鈣蛋白ITnI)抗體轉(zhuǎn)化為嵌合蛋白。嵌合cTnI抗體Rec19C7Rec16A11由負(fù)責(zé)抗原特異性的原始小鼠來(lái)源可變區(qū)和IgG1同種型的人類(lèi)來(lái)源恒定區(qū)組成(見(jiàn)圖2)。

     

    ![2. Hytest嵌合cTnI抗體的示意圖

     

     同種型轉(zhuǎn)換對(duì)抗體性能無(wú)影響

    天然19G7抗體的亞類(lèi)為IgG2b,而嵌合RecChim19C7的亞類(lèi)為IgG1。為了確定同種型轉(zhuǎn)換是否有任何影響,我們?cè)趲追N抗體組合中比較了天然和嵌合19C7的性能(見(jiàn)圖3)。結(jié)果證明兩種19C7形式的性能非常相似,觀察到的差異在15%以內(nèi),這與批間變異系數(shù)一致。

     

    ![3. 同種型轉(zhuǎn)換對(duì)抗體19C7的性能沒(méi)有影響。

     

    A)檢測(cè)步驟的示意圖。使用天然(左)或嵌合(右)19C7作為捕獲抗體,用Eu3?標(biāo)記的天然抗cTnI560MF4625560)作為檢測(cè)抗體,肌鈣蛋白復(fù)合物作為抗原。

     

    B)如圖所示,在四種不同的夾心免疫測(cè)定中,將嵌合RecChim19C7(亞類(lèi)IgG1)的性能與天然19C7(亞類(lèi)IgG2b)進(jìn)行了比較。

     

     嵌合抗體可防止體外診斷檢測(cè)中的HAMA效應(yīng)

    為驗(yàn)證嵌合抗體對(duì)HAMA效應(yīng)不敏感,使用從AMI患者獲得的含HAMA的血清樣本測(cè)試了嵌合抗體和天然抗體的不同組合的性能。血清樣本中的HAMA濃度范圍為807 ng/ml6220 ng/ml(見(jiàn)圖4)。含HAMA最高的血清在所有基于天然抗體的組合中都產(chǎn)生了非常高的背景信號(hào)。同時(shí),含HAMA較低的血清樣本產(chǎn)生了較低但顯著的背景信號(hào)。與此同時(shí),所有使用嵌合抗體的檢測(cè)在所有測(cè)試的HAMA樣本中要么沒(méi)有背景信號(hào),要么只有可忽略的背景信號(hào)。

     

    ![4. 嵌合抗體可減輕HAMA效應(yīng)。

     

    使用三種不同HAMA濃度的血清樣本測(cè)試了嵌合和天然19C716A11HAMA存在下的性能:樣本1中為807 ng/ml,樣本2中為1388 ng/ml,樣本3中為6220 ng/ml。使用不含血清的緩沖液作為對(duì)照。測(cè)試了以下免疫測(cè)定組合:4C2-19C74C2-RecChim19C7A),4C2-16A114C2-RecChim16A11B),以及19C7-16A1119C7-RecChim16A11C)。

     

    該測(cè)試結(jié)果清楚地表明,使用嵌合抗體可以防止HAMA效應(yīng),這使其成為解決這一常見(jiàn)問(wèn)題的潛在新工具。

     

     訂購(gòu)信息

    單克隆抗體

     

    |產(chǎn)品名稱(chēng)|目錄號(hào)|單克隆抗體|亞類(lèi)|備注|

     

    |重組嵌合抗cTnI|RC4T21|RecChim19C7|IgG1|酶免疫測(cè)定|

    |RecChim16A11|IgG1|酶免疫測(cè)定|

     

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    科學(xué)越,服務(wù)體外診斷

     

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