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    anatrace技術公告100如何純化膜蛋白膜

    發布時間: 2020-03-12  點擊次數: 1937次

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    技術公告100如何純化膜蛋白膜

    蛋白的研究在過去幾年中取得了顯著的進展。 這在一定程度上要歸功于用于操縱這類蛋白質的工具和試劑的進步。 洗滌劑在膜蛋白的提取、純化和操作中起著重要作用,它們的兩親性使它們能夠與疏水性膜蛋白相互作用,使它們在自然的雙分子層環境之外保持水溶性。 不幸的是,溶解性并不總是轉化為天然結構和穩定性; 用于萃取的洗滌劑可能與凈化和 / 或生化研究不兼容。 此外,適用于一種膜蛋白的洗滌劑可能不適用于另一種膜蛋白。 雖然沒有一套關于清潔劑用于膜蛋白的“ 法則” ,但是了解如何凈化膜蛋白在開始你的研究工作時是很有用的。 1. 從類似的來源和類似的薄膜中尋找其他的凈化物。 不同的組織、生物和膜類型有時需要不同的清潔劑和條件; 例如,細菌來源可能需要哺乳動物來源的不同溶解程序。

    *分散和脂質過濾是色譜分離成功的關鍵。 如果蛋白質不能從其他蛋白質中分離出來,并且大量附著的磷脂被去除,那么蛋白質就不能根據自身的特性進行結合和色譜分析。 相反,它會在附著的其他蛋白質和脂質的基礎上表現異質性。3。 一種有利于增溶完整膜和去除多余脂質的清潔劑可能不是繼續純化“裸蛋白”的佳選擇(可能太粗糙)。 因此,在初的步驟中,你可能想要選擇一種相對便宜、相對純凈的洗滌劑,這種洗滌劑可以很容易地換成另一種。 例如,膽酸鹽和類固醇清潔劑都是強烈的,帶電的或兩性離子的,類固醇清潔劑可以很好地破壞薄膜,有助于去除色譜步驟中多余的脂質,例如羥基磷灰石。 他們也有一個高臨界膠束,這意味著他們可以很容易地通過透析或交換另一個柱。

    色譜純化需要一種良好的分散清潔劑,既能穩定蛋白質,又不會使酶失活。 對許多人來說,triton x-100是非常適合的,但是污染物和280納米吸光度的問題。 十二個碳鏈長度的碳氫化合物尾巴通常是必要的良好的穩定和分散,特別是較大的多亞基酶。 十二烷基麥芽糖苷的效果通常和海衛一一樣好,甚更好,沒有任何缺點。 短鏈洗滌劑和一些帶電洗滌劑會分離多亞基蛋白質。 在這個階段,反復試驗是非常重要的,要注意保持足夠高的洗滌劑與蛋白質的比例,以確保蛋白質能夠很好地分散(洗滌劑的濃度將遠遠高于 cmc)。 即使一種蛋白質在某種特定的洗滌劑中不活躍,如果你能證明這種活躍是可逆的,通過添加脂質或其他洗滌劑,你仍然可以使用它。

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